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.,發(fā)酵車間培訓(xùn)資料,生產(chǎn)二部 2017.06.12,.,第一部分 意識(shí)的培養(yǎng),我們的發(fā)酵屬于純培養(yǎng)，是由單一菌種接種以 后進(jìn)行的培養(yǎng)，其中不可以有任何雜菌，否則會(huì)影 響發(fā)酵的成敗及產(chǎn)品的使用效果，所以為了確保每一批發(fā)酵的成功，在生產(chǎn)過(guò)程中菌種、發(fā)酵人員必須具備以下兩種意識(shí)： 無(wú)菌意識(shí) 由于微生物個(gè)體小、分布廣泛等特性，發(fā)酵染菌 的途徑有很多，而且如果染菌的話，我們無(wú)法及時(shí) 做出判斷，必須培養(yǎng)一段時(shí)間才能看出來(lái)，發(fā)現(xiàn)以 后的結(jié)果只能是重消、提前放罐或倒罐，造成不小的損失，所以生產(chǎn)過(guò)程中每一個(gè)環(huán)節(jié)都必須具備無(wú)菌意識(shí)，每一步操作都按照操作規(guī)程進(jìn)行，抓住每一個(gè)細(xì)節(jié)，才能確保不會(huì)染菌。 無(wú)菌意識(shí)是每一個(gè)菌種、發(fā)酵、生測(cè)人員具有的意識(shí)。,.,2、安全意識(shí) 空氣壓力能達(dá)到0.25~0.3MPa；正常供氣壓力0.15-0.2MPa，（儀表用空氣注意減壓）；空氣溫度：50+5℃ 蒸汽壓力0.4-0.6MPa以上，防止壓力過(guò)高擊穿墊片、閥門(mén)等 設(shè)備用電；（本崗位熟練人員操作、防水...維修必須專業(yè)電工進(jìn)行） 機(jī)械攪拌；（設(shè)備檢修必須切斷電源且有明顯的標(biāo)識(shí)牌、高速離心設(shè)備注意平衡及緊鎖裝置） 酸堿、易燃易爆、粉塵：防護(hù)措施及應(yīng)急措施。 ⑤ 進(jìn)罐檢查：切點(diǎn)電源、明顯標(biāo)識(shí)牌、有人值守 ⑥ 人員著裝 ⑦ 發(fā)酵罐：空消、實(shí)消等加熱狀態(tài)打開(kāi)夾套排污閥，防止夾套或內(nèi)壁損毀；移種、放罐升高壓力后，不能同時(shí)關(guān)閉進(jìn)氣、排氣閥門(mén)，防止罐內(nèi)產(chǎn)生負(fù)壓。,.,第二部分、發(fā)酵罐罐體管道結(jié)構(gòu)介紹,空氣路：培養(yǎng)過(guò)程中向罐內(nèi)通無(wú)菌空氣 蒸汽管路 物料管路：配料管路、補(bǔ)料管路 取樣路：培養(yǎng)過(guò)程中取樣監(jiān)控菌體生長(zhǎng)情況 尾氣路：排氣（大排氣、小排氣） 出料路：移種、放罐 夾套進(jìn)水路：冷凍水、循環(huán)水、熱水（蒸汽） 夾套回水路：冷凍水、循環(huán)水、熱水（蒸汽） 排污管路,.,.,各種圖形、顏色代表的意義,.,.,第三部分、發(fā)酵基本操作過(guò)程,.,第一：罐檢 目的：快速檢查發(fā)酵罐，確保發(fā)酵罐正常，可以上罐。 檢查項(xiàng)目： 閥門(mén)：所有閥門(mén)是否能正常使用、是否處于正確的位置。 壓力表：壓力表是否歸零。 PH和溶氧電極：電極是否拔出并正確保養(yǎng)。 罐體：罐內(nèi)是否清洗干凈。 攪拌電機(jī)：點(diǎn)動(dòng)電機(jī)，看電機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)是否正常。 攪拌葉輪、消泡裝置是否緊固，有無(wú)松動(dòng)等。 第二：空消 空消主要目的是在進(jìn)罐生產(chǎn)前對(duì)設(shè)備清潔和殺滅其他微生物，防止因設(shè)備清潔不徹底或設(shè)備停用時(shí)間過(guò)久，微生物滋生，從而對(duì)生產(chǎn)造成影響。 1、放罐后及時(shí)清洗空消。 2、長(zhǎng)期不用罐或更換品種、染菌罐需空消。 3、空消之后無(wú)菌空氣保壓待用。,.,空消操作流程,.,第三、電極標(biāo)定 目的：為了確保電極準(zhǔn)確測(cè)量，必須在使用前對(duì)電極進(jìn)行標(biāo)定。 注意事項(xiàng)： 新電極或放置很久的電極必須激活以后才可以進(jìn)行標(biāo)定和使用。PH電極用3moL/L的KCl溶液浸泡6小時(shí)激活，溶氧電極通電6小時(shí)激活。 PH電極標(biāo)定的時(shí)候需要將接地電極放入盛放標(biāo)準(zhǔn)液的燒杯內(nèi)。 接種以后設(shè)定好發(fā)酵參數(shù)，然后進(jìn)行溶氧電極百分百標(biāo)定。,.,電極標(biāo)定參數(shù)：,.,第四：配料 增容： 實(shí)消過(guò)程中部分蒸汽會(huì)冷凝形成冷凝水進(jìn)入 培養(yǎng)基中，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基體積變大，變大的部分 即為增容。不同的地區(qū)，不同的氣候，不同的產(chǎn)品品種及原料增容量都會(huì)不同的，需要通過(guò)多次實(shí)消滅菌總結(jié)才能得到一個(gè)經(jīng)驗(yàn)值。10-30% 領(lǐng)料：正確填寫(xiě)領(lǐng)料單，從倉(cāng)庫(kù)領(lǐng)料，并從領(lǐng)料單簽字確認(rèn)。 溶料：按工藝要求順序溶解各種原料； 原料全部溶解，無(wú)雜質(zhì)、無(wú)硬塊。 投料：確認(rèn)電極已經(jīng)安裝上，出料一閥已經(jīng)關(guān)閉。 考慮增容和種子體積，定容到發(fā)酵消前體積。,.,第五：實(shí)消 發(fā)酵罐實(shí)消是對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行徹底的滅菌處理, 利用高溫過(guò)飽和蒸汽的強(qiáng)穿透能力使各種細(xì)菌、真菌蛋白質(zhì)凝固而死亡。實(shí)消結(jié)束以后罐內(nèi)是無(wú)菌的環(huán)境，需通入無(wú)菌空氣進(jìn)行保壓直到培養(yǎng)結(jié)束。 實(shí)消操作流程預(yù)熱：打開(kāi)夾套排污，用蒸汽進(jìn)行預(yù)熱 當(dāng)溫度達(dá)到90度以上停止預(yù)熱，關(guān)閉攪拌。升溫：三路進(jìn)汽；當(dāng)壓力升到0.05MP a時(shí)打開(kāi)所有 和罐體連接的排汽閥門(mén)，消毒過(guò)程不得有消毒死角。保壓：調(diào)節(jié)三路進(jìn)氣及排汽，常規(guī)滅菌保壓過(guò)程：溫度121 壓力0.12 30分鐘滅菌結(jié)束：保壓結(jié)束先關(guān)閉各小排氣及取樣、放料管路進(jìn)汽，待罐壓低于精過(guò)濾器壓力后，快速關(guān)閉空氣管路蒸汽閥門(mén)，打開(kāi)空氣閥門(mén)，調(diào)整進(jìn)氣、排氣閥門(mén)，保持罐壓0.05-0.1MPa；降溫：開(kāi)啟冷卻水降溫至工藝要求溫度，降溫過(guò)程注意罐壓，防止罐壓掉零。,.,消毒過(guò)程中的注意事項(xiàng) 1、首先要結(jié)合配料工共同確認(rèn)本批罐所用的原料為合格品，發(fā)現(xiàn)有結(jié)塊、變質(zhì)的原料不得使用。 2、在用泵向罐中打配制好的培養(yǎng)基時(shí)要注意保持稍開(kāi)些進(jìn)氣，讓料翻騰，以防（前期）培養(yǎng)基濃度過(guò)大沉淀粘附在罐底、結(jié)塊等。 3、打完料后首先調(diào)至適宜的PH，再確認(rèn)一下所有的培養(yǎng)基都已加入后封住罐口，開(kāi)始從進(jìn)氣口、放料口、取樣口等分路進(jìn)入蒸汽。各路保持均衡進(jìn)汽，防止短路 和堵塞，排氣要暢通，排汽量不宜過(guò)大，以節(jié)約蒸汽。 4、在實(shí)消過(guò)程中要保持壓力的穩(wěn)定，不宜突然卸壓升壓以防造成大量泡沫冒頂或逃料。 5、在實(shí)消控制時(shí)原則上以溫度為準(zhǔn)，壓力為輔。但是在保壓時(shí)可能出現(xiàn)壓力表與溫度計(jì)不對(duì)應(yīng)的情況， 在不能確定到底是溫度計(jì)還是壓力表失靈時(shí)，當(dāng)壓力表顯示壓力大于等于0.1Mpa,而溫度不到121℃時(shí)，以溫度計(jì)為準(zhǔn)；反之，則以壓力表為準(zhǔn) ，總之要確保壓力與溫度都達(dá)到滅菌要求。,.,6、如遇蒸汽壓力突然升高，罐溫超過(guò)規(guī)定，可適當(dāng)縮短滅菌時(shí)間；如遇蒸汽壓力突然下跌，一時(shí)上不來(lái)，溫度下降到規(guī)定范圍以下，可適當(dāng)延長(zhǎng)滅菌時(shí)間，以確保滅菌徹底。嚴(yán)防高溫高壓悶罐，否則容易造成培養(yǎng)基成分破壞和PH值升高。 7、在實(shí)消結(jié)束降溫時(shí)在確定空氣過(guò)濾器的壓力大于罐壓時(shí)，可以先打開(kāi)空氣進(jìn)氣閥，再開(kāi)冷卻水閥以防外界空氣倒吸進(jìn)去。 8、在降溫過(guò)程中嚴(yán)防大開(kāi)排氣閥使罐壓幾乎跌零，特別是種子罐裝料系數(shù)較大，這樣做會(huì)使料液翻騰劇烈產(chǎn)生大量的泡沫，易出現(xiàn)冒頂或逃料。 9、在消移種管道時(shí)要確保整個(gè)管道打氣暢通，嚴(yán)防堵塞 或排氣不暢。在消好后，通入無(wú)菌空氣（即給管道降溫又能使管道內(nèi)保持正壓）。 10、移種結(jié)束后要把發(fā)酵罐調(diào)至正常培養(yǎng)狀態(tài)并交工藝控制人員；填寫(xiě)移種記錄；移種后對(duì)移種管道消毒，吹盡管道內(nèi)參與種液，放置殘余種液在管道內(nèi)滋生。,.,第六、接種 接種方法：壓差接種法 接種材料：種子液、火焰圈、95%酒精、酒精棉、鑷子、打火機(jī)、石棉手套 注意事項(xiàng)： 環(huán)境：關(guān)閉車間門(mén)窗和排氣扇，接種環(huán)境周圍禁止人員來(lái)回走動(dòng)，降低空氣流動(dòng)性；關(guān)掉攪拌。 無(wú)菌：拔接種針護(hù)套時(shí)需靠在火焰附近，接種壺不可傾斜過(guò)度，避免種子液流出；接種操作過(guò)程中罐壓不能掉零； 安全：罐壓不可過(guò)高，防止接種管爆裂或脫落，接種失??； 接種之前要確認(rèn)種子與罐的對(duì)應(yīng)關(guān)系，防止接錯(cuò)種子。,.,第七、工藝控制與記錄 1、記錄 每間隔1小時(shí)記錄一次參數(shù)； 主要參數(shù)有PH值、風(fēng)量、轉(zhuǎn)速、溶氧值、溫度、壓力和、補(bǔ)料量、備注等。 取樣 依據(jù)工藝要求按時(shí)取樣送交化驗(yàn)部并做好鏡檢工作。 取樣前后的消毒、廢液的收集處理 3.工藝控制 根據(jù)工藝參數(shù)（如溶氧、PH）的變化和檢測(cè)（糖、氮、OD、目的產(chǎn)物等）結(jié)果，對(duì)工藝參數(shù)進(jìn)行調(diào)整控制。 設(shè)備巡查 檢查攪拌電機(jī)，看電機(jī)有沒(méi)有異響、過(guò)熱等； 檢查酸堿罐、消泡罐和補(bǔ)料罐裝液量，及時(shí)補(bǔ)充； 檢查管道、閥門(mén)，看有無(wú)外漏。,.,第八：放罐 達(dá)到工藝放罐標(biāo)準(zhǔn)條件即可放罐，放罐操作流程如下： 提前通知后提取車間準(zhǔn)備放罐 取樣（常溫保存和低溫保存） 蒸汽消毒放罐管道 檢查管道閥門(mén) 升壓 放罐 吹洗放料管道內(nèi)殘余料液。 填寫(xiě)記錄表格（放罐體積、工藝技術(shù)指標(biāo)等） 第九：洗罐 放罐結(jié)束以后立即進(jìn)行洗罐，洗罐流程如下： 卸壓：打開(kāi)罐蓋前要先卸掉罐壓； 電極保養(yǎng)：拔出電極清洗干凈以后進(jìn)行正確保養(yǎng)； PH電極用3摩爾每升的KCl溶液浸泡電極頭； 溶氧電極直接通電。 沖洗罐壁：用高壓水槍沖洗罐壁，如果罐壁培養(yǎng)基沖洗不掉則考慮堿煮（5%的堿液用夾套升溫到80℃以后保溫30分鐘）； 排污：排掉污水。,.,第十、檢修 目的：確保閥門(mén)、法蘭、機(jī)械密封和試鏡燈等不會(huì)泄漏，以備下批生產(chǎn)使用； 方法：罐體通入空氣保壓在0.15MPa，然后用肥皂水進(jìn)行試漏，出現(xiàn)泄漏的閥門(mén)待壓力卸掉以后進(jìn)行檢修，更換相應(yīng)的墊片。,.,第四部分 染菌的發(fā)生、原因分析及防治 發(fā)酵工業(yè)自從采用純種培養(yǎng)以后，產(chǎn)率有了很大提高，然而防止染菌的要求也更高了。染菌是發(fā)酵工業(yè)的致命傷，輕者影響產(chǎn)率、提取收率、產(chǎn)品質(zhì)量和三廢治理，嚴(yán)重者造成倒罐，浪費(fèi)大量原材料，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，而且擾亂生產(chǎn)秩序，破壞生產(chǎn)計(jì)劃。 在發(fā)酵染菌之后，必須分析染菌原因，總結(jié)發(fā)酵染菌的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，把發(fā)酵染菌消滅在發(fā)生之前，防患于未然，是積極制服發(fā)酵染菌的最重要措施。 一、不同染菌時(shí)間對(duì)發(fā)酵的影響 1、種子培養(yǎng)期染菌 種子培養(yǎng)主要是生長(zhǎng)繁殖菌體，菌體濃度低，培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)豐富，比較容易染菌，帶進(jìn)發(fā)酵罐中危害極大，應(yīng)嚴(yán)格控制種子污染。當(dāng)發(fā)現(xiàn)種子染菌均應(yīng)滅菌后倒入地溝，并對(duì)種子罐、管道進(jìn)行檢查和徹底滅菌。 2、發(fā)酵前期染菌 發(fā)酵前期主要是菌體生長(zhǎng)繁殖，代謝產(chǎn)物較少，這個(gè)時(shí)期容易染菌，一旦污染雜菌會(huì)迅速繁殖，與生產(chǎn)菌爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)成分和氧分，嚴(yán)重干擾生產(chǎn)菌的生長(zhǎng)繁殖和產(chǎn)物的生成，要特別防止發(fā)酵前期染菌。緊急處理措施：如果污染危害較大的雜菌不能繼續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)，必須重新滅菌。重滅前可適當(dāng)放出部分發(fā)酵液，并補(bǔ)入適量的培養(yǎng)基特別是氮源使消后的培養(yǎng)基符合發(fā)酵要求，滅后調(diào)節(jié)好PH后重新移種或倒種。,.,如果污染的雜菌無(wú)大的影響，可以繼續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)，但要密切注意發(fā)酵過(guò)程的代謝情況和雜菌的變化，必要時(shí)可適當(dāng)降低罐溫、空氣流量、和控制補(bǔ)料量進(jìn)行發(fā)酵。 3、發(fā)酵中期染菌 發(fā)酵中期染菌將嚴(yán)重干擾生產(chǎn)菌的代謝，影響產(chǎn)物的生成。有些雜菌繁殖后產(chǎn)生酸性或堿性物質(zhì)，使PH值異常變化加堿突增或驟減，糖、氮消耗迅速，菌體自溶，發(fā)酵液發(fā)粘或渾濁，產(chǎn)生大量泡沫，代謝產(chǎn)物的積累迅速減少或停止或下降，有的發(fā)酵液發(fā)臭。發(fā)酵中期染菌，由于營(yíng)養(yǎng)成分大量消耗，一般挽救處理困難，危害性很大常用的方法有：降低罐溫，控制殘?zhí)橇?，降低空氣流量或冷置待放?4、發(fā)酵后期染菌 發(fā)酵后期產(chǎn)物積累較多，糖等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)接近耗盡，如果染菌不太多，可繼續(xù)進(jìn)行發(fā)酵；如污染嚴(yán)重，破壞性較大，可以采取提前放罐。,.,二、不同染菌規(guī)模的原因分析 1、當(dāng)發(fā)酵出現(xiàn)連續(xù)染菌或大面積染菌，一般是公用系統(tǒng)有問(wèn)題，特別是空氣系統(tǒng)?？偪者^(guò)濾器失效，過(guò)濾效率下降，新裝過(guò)濾器要裝好，避免空氣走短路。 接種和中間補(bǔ)糖設(shè)備系統(tǒng)有滲漏和死角，也會(huì)造成大面積染菌因此要按時(shí)檢查維修相關(guān)設(shè)備。 2、部分發(fā)酵罐染菌，發(fā)生在前期可能是滅菌不徹底或種子罐帶菌所致，同時(shí)也與公用接種設(shè)備系統(tǒng)有關(guān)；染菌發(fā)生在中后期，一般與補(bǔ)料有關(guān)。 3、個(gè)別罐連續(xù)染菌時(shí)要檢查該罐設(shè)備的各個(gè)部件，查找有無(wú)滲漏和死角，如降溫盤(pán)管穿孔是造成染菌的多見(jiàn)原因之一。個(gè)別罐批偶爾染菌，原因比較復(fù)雜，要針對(duì)具體情況，視染菌時(shí)間和染菌類型，從操作到設(shè)備作具體分析。,.,三、從染菌類別上分析原因 1、染革蘭氏陽(yáng)性桿菌、酵母菌等其它雜菌多是由空氣系統(tǒng)中帶入而造成污染也有可能是種子帶菌 2、染革蘭氏陰性桿菌、特別是球菌大多數(shù)因設(shè)備滲漏所致，帶菌的冷卻水或污水，從冷卻盤(pán)管、連接法蘭、襯里焊縫中滲漏進(jìn)入發(fā)酵罐培養(yǎng)基中。 3、染耐熱的芽孢桿菌，可能是培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底但并不是絕對(duì)的，空氣帶菌也常引起染芽孢桿菌； 4、染霉菌，一般是無(wú)菌室滅菌不徹底或操作問(wèn)題 四、染菌的途徑和防治 （一）種子帶菌及其防治 種子帶菌的原因： 1、培養(yǎng)基及用具滅菌不徹底 菌種培養(yǎng)基及用具滅菌均在滅菌鍋中進(jìn)行，造成滅菌不徹底主要是滅菌時(shí)鍋內(nèi)空氣排放不完全，造成假壓，使滅菌時(shí)溫度還達(dá)不到要求。 2、菌種在移種過(guò)程中受污染 菌種的移接工作是在無(wú)菌室中，按無(wú)菌操作進(jìn)行的。當(dāng)菌種移接操作不當(dāng)或管理不嚴(yán)，就可能引起污染。,.,3、菌種在培養(yǎng)過(guò)程或保藏過(guò)程中受污染 菌種在培養(yǎng)過(guò)程和保藏過(guò)程中，由于外界空氣進(jìn)入，也使雜菌進(jìn)入而受污染。為了防止污染，試管的棉花塞應(yīng)有一定的緊密度，不宜太松，且有一定的長(zhǎng)度，培養(yǎng)和保藏溫度不宜變化太大。在放入搖床后要經(jīng)常去檢查種母搖瓶的狀況。 （二）無(wú)菌空氣帶菌及防止 空氣凈化系統(tǒng)失效或空氣精過(guò)、預(yù)過(guò)減效是發(fā)酵染菌的主要原因之一。具體防止措施：定期更新主空氣系統(tǒng)的過(guò)濾介質(zhì)，加強(qiáng)平時(shí)系統(tǒng)的排污除水，特別是在多雨或潮濕的天氣。確保進(jìn)入車間之前的空氣升溫至45--55℃，使相對(duì) 濕度下降，定時(shí)拆檢空氣精過(guò)、預(yù)過(guò)。（做空氣系統(tǒng)無(wú)菌檢查） （三）培養(yǎng)基和設(shè)備滅菌不徹底帶菌及防止 培養(yǎng)基和設(shè)備滅菌不徹底的原因，主要與以下幾個(gè)方面有關(guān) 1、原料形狀 一般稀薄的培養(yǎng)基容易滅菌徹底，而含有固體顆?；蛘吵頎钗锪蠒r(shí)容易由于滅菌不徹底而造成染菌。這就要求在投料時(shí)確保攪拌混合均勻。 2、實(shí)消時(shí)未充分排除罐內(nèi)空氣 實(shí)消時(shí)罐內(nèi)空氣未完全排除造成假壓，使罐頂空間局部溫度達(dá)不到滅菌要求，導(dǎo)致滅菌不徹底而污染。因此在實(shí)消升溫時(shí)，應(yīng)打開(kāi)排氣閥門(mén)及有關(guān)連接管的邊閥、罐頂部的接管邊閥，使蒸汽通過(guò)達(dá)到徹底滅菌。,.,3、設(shè)備管道存在死角染菌及防止 由于操作、設(shè)備結(jié)構(gòu)、安裝或人為造成的等原因，引起蒸汽不能到達(dá)預(yù)定部位，這就是死角。所以發(fā)酵罐要合理簡(jiǎn)化安裝管、閥。凡不合理的管、閥、開(kāi)孔都要堅(jiān)決去掉，遺留的孔眼要焊平，消除隱患。管道之間盡可能用焊接來(lái)代替法蘭，不能用直角彎頭，要保持管道暢通、光滑、密封。主要閥門(mén)及其墊應(yīng)經(jīng)常檢查更換。 4、設(shè)備滲漏引起染菌及防止 發(fā)酵設(shè)備、管道、閥門(mén)的長(zhǎng)期使用，由于腐蝕、摩擦、振動(dòng)或憋壓等原因，往往會(huì)造成滲漏。例如：設(shè)備的表面或焊縫處有砂眼，由于腐蝕逐漸加深，最終導(dǎo)致穿孔；冷卻管受攪拌器作用，長(zhǎng)期磨損，焊縫處受冷熱和振動(dòng)產(chǎn)生裂縫而滲漏。防止措施：要選用優(yōu)質(zhì)材料并經(jīng)常檢查，小滲漏不易發(fā)現(xiàn)時(shí)可壓入堿性水，在可疑的地方用浸濕的酚酞指示劑的白布擦，如有滲漏時(shí)白布顯紅色。 5、操作問(wèn)題 在發(fā)酵過(guò)程中如操作不當(dāng)也引起染菌，如移種時(shí)或發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)罐內(nèi)壓力跌零，使外界空氣進(jìn)入而染菌；泡沫冒頂而造成染菌；壓縮空氣壓力突然下降使發(fā)酵液倒流入空氣過(guò)濾器而造成染菌等等；防止措施：加強(qiáng)對(duì)一線操作人員的無(wú)菌操作培訓(xùn)和始終貫徹?zé)o菌操作制度及責(zé)任心教育，加強(qiáng)管理措施。,.,6、環(huán)境衛(wèi)生 發(fā)酵車間和菌種室的內(nèi)外環(huán)境，必須保持干凈整潔，定期清掃和消毒，車間周圍不得堆放廢棄物，不允許有活菌排放；有異味或易飛揚(yáng)的物料的貯存，應(yīng)遠(yuǎn)離發(fā)酵車間和菌種室。 五、染菌的檢查 （一）感官檢查 1、大部分染菌的發(fā)酵液可以從發(fā)酵的異常情況來(lái)檢出，如色澤、異味、變稠或變稀、加堿速率、菌絲變形產(chǎn)酸不正?；虿划a(chǎn)酸或倒酸而糖卻消耗很快。 2、借助顯微鏡，常用梅蘭染色、結(jié)晶紫染色和革蘭氏染色來(lái)判斷。 （二）、無(wú)菌平皿劃線檢查 平板檢查法既可檢查出雜菌污染，又可以檢查出有無(wú)噬菌體污染。檢查雜菌時(shí)，先將滅菌后的培養(yǎng)基倒入已經(jīng)滅,.,（四）、環(huán)境衛(wèi)生 發(fā)酵車間和菌種室的內(nèi)外環(huán)境，必須保持干凈整潔，定期清掃和消毒，車間周圍不得堆放廢棄物，不允許有活菌排放，有異味或易飛揚(yáng)的物料的貯存，應(yīng)遠(yuǎn)離發(fā)酵車間和菌種室。 七、染菌的檢查 1、培養(yǎng)液的生化指標(biāo)變化情況。 大部分染菌的發(fā)酵液可以從發(fā)酵的異常情況來(lái)檢出，如色澤、異味、粘度、PH、DO、菌絲形狀、產(chǎn)酸、耗糖、產(chǎn)物等。 2、鏡檢：常用美蘭染色、結(jié)晶紫染色和革蘭氏染色來(lái)判斷。 3、無(wú)菌試驗(yàn) 平板檢查法：既可檢查出雜菌污染，又可以檢查出有無(wú)噬菌體污染。檢查雜菌時(shí)，先將滅菌后的培養(yǎng)基倒入已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻后置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)，進(jìn)行鏡檢?；蛘邔⒋龣z樣品置于37℃培養(yǎng)6小時(shí)，使細(xì)菌生長(zhǎng)，增加數(shù)量，然后再劃線接種培養(yǎng)。這樣可以提高平板法的靈敏度 肉湯培養(yǎng)檢查法：主要用于空氣系統(tǒng)和培養(yǎng)基染菌的檢查。具體的做法是將培養(yǎng)液裝在吸所瓶中，滅菌30分鐘后，置于37℃培養(yǎng)24小時(shí)，如無(wú)混濁即可用于上述兩項(xiàng)的檢查。將無(wú)菌空氣或滅菌后的培養(yǎng)基引入后保溫培養(yǎng)，觀察有無(wú)混濁現(xiàn)象發(fā)生，如呈現(xiàn)渾濁說(shuō)明染菌,