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實驗一、普通生物顯微鏡的使用(一),動、植物細胞、真菌的觀察及生物繪圖法,一、實驗目的：,1.了解普通光學顯微鏡和體視顯微鏡的基本構造及功用，并正確掌握使用和維護方法。2.觀察一些真核細胞的結構，學習基本生物繪圖方法。3.學習臨時裝片的制作方法。,二、實驗原理：,（一）、顯微鏡概述：顯微鏡是觀察細胞的主要工具。根據光源不同，可分為光學顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。,（二）、顯微鏡的發(fā)明：,1.最早由荷蘭眼鏡商在1600年前后制造的，它的結構簡單，放大倍數只有10～30倍，可以觀察一些小昆蟲，如跳蚤等，因而有人稱它為“跳蚤鏡”。這種顯微鏡是用光線照明的，屬于光學顯微鏡。,2.英國物理學家羅伯特虎克（RobertHooke，1635—1703）研制出能夠放大140倍的光學顯微鏡，并用它來觀察軟木薄片，發(fā)現了細胞。,3.1673年有個名叫列文.虎克（AntonivanLeeuwenhoek）的荷蘭人用自己制造的顯微鏡觀察到了被他稱為“小動物”的微生物世界。他也被稱為微生物的開山祖。,,,,,,4.1938年，德國工程師魯斯卡（ErnestRuska,1906-1988)制造出世界第一臺透射電子顯微鏡（TEM）。1952年，英國工程師CharlesOatley制造出第一臺掃描電子顯微鏡（SEM）,,（三）、顯微鏡的分辨率:,分辨率：也稱為分辨力，它是指能把兩個物點分辨清楚的最小距離。分辨率數值越高，分辨距離越大，則分辨率越低。反之亦然。所以，分辨率是以分辨距離來表示的。其計算公式為:D=0.61入/NANA=nsina/2式中D為分辨率，A為光波波長，NA為物鏡的數值孔徑(鏡口率)。,在物鏡上，有鏡口率(N.A.)的標志，它反應該鏡頭分辨力的大小，其數字越大，表示分辨率越高。各物鏡的鏡口率如下表：物鏡鏡口率(N.A.)工作距離(mm)100.255.40400.650.391001.300.11顯微鏡的總放大倍數=目鏡放大倍數物鏡放大倍數公式為:M=K1K2,焦點深度:顯微鏡調焦到看清標本某一點時，不僅是這一物點，而且它的上下兩側也能看清楚的厚度叫做焦點深度。要看到標本的全厚度，必須調節(jié)螺旋仔細地從上到下進行觀察。,三、材料和儀器：,儀器：普通光學顯微鏡、體視鏡（附顯微用品：擦鏡紙、香柏油、二甲苯、載玻片、蓋玻片）材料與器材：新鮮酵母液、滴管、鑷子、培養(yǎng)皿、標本盒（內有各種裝片）,四、實驗步驟：,（一）普通顯微鏡的使用及維護：I.光學顯微鏡的構造普通生物顯微鏡由2部分構成：①：光學部分：包括物鏡、目鏡、光源、聚光器，是顯微鏡的主體。②：機械部分：包括鏡筒、鏡臂、鏡座、鏡臺(載物臺）、調節(jié)旋鈕、物鏡轉換器等，用于固定材料和觀察方便。,II.顯微鏡的使用,1.觀察前的準備工作①.顯微鏡在使用之前應檢查一下它的各個部件是否完整和正常，并對載物臺、目鏡、物鏡以及聚光器上端透鏡進行必要的清潔工作。然后進行調節(jié)。②.觀察時要雙眼同時睜開，一邊觀察一邊進行記錄或描繪。③.觀察時所用的材料、藥品和各種器具要預先備好,2.使用方法：（1）低倍鏡的使用：觀察任何標本，均需從低倍鏡開始。①檢查：檢查顯微鏡是否完好。②準備：將顯微鏡放于前方略偏左，轉動粗調旋鈕將載物臺下降，旋轉物鏡轉換器使低倍鏡正對通光孔。③對光：④放標本片：⑤調節(jié)焦距⑥計算放大倍數：,錯誤原因：如按上述操作，依然看不到圖象，可能有以下原因：A.轉動調節(jié)太快，超過焦點，需重新調節(jié)。B.物鏡未對準通光孔。C.標本沒放在視野內，需移動標本片尋找觀察對象。D.光線太強或太弱。尤其觀察透明或未染色標本時，應將光線調稍暗些，有利觀察。,（2）高倍鏡的使用：①依照上述操作步驟，先用低倍鏡找到清晰物象，②將需要觀察的部分移到視野中央，③眼睛從側面注視物鏡，移動轉換器，換高倍鏡，④看目鏡，微調細調旋鈕，至看到清晰物象。,錯誤原因：如按上述操作，依然看不到圖象，可能有以下原因：A.觀察的標本不在視野內。應在低倍鏡下找到后，移到視野中央，再換高倍鏡觀察。B.標本放反了。C.焦距未調好。,（3）油鏡的使用：①先用低倍鏡觀察標本情況。②換高倍鏡，把需觀察的部分移至視野中央。③將聚光器升至最高位置，光圈開至最大。④在蓋玻片所要觀察的位置滴一小滴香柏油，放于載物臺。⑤把油鏡移至工作位置。,⑥慢慢調節(jié)粗細調節(jié)旋鈕，使載物臺緩慢上升，同時細心從側面觀察物鏡前端與標本之間的距離。先使物鏡前端與油滴接觸，再慢慢上升載物臺，至物鏡前端接近而沒有碰觸到蓋玻片為止。（小心損傷油鏡或裝片）⑦眼睛從目鏡觀察，緩慢調節(jié)細調旋鈕至看清標本（注意只能下降載物臺）,⑧觀察完畢，下降載物臺，使油鏡離開光軸，及時做好油鏡的清潔工作（先用干凈的擦鏡紙擦去大部分香柏油，再用二甲苯滴濕的擦鏡紙擦拭兩次，最后用干的擦鏡紙擦拭一次）。玻片上的油可用“拉紙法”擦去：把一小張擦鏡紙蓋在載玻片的油滴上，其上滴一兩滴二甲苯，趁濕把紙往外拉，連續(xù)幾次，即可擦凈（注意不要使用過多的二甲苯，并及時擦干凈上面的香柏油，以免使裝片受損）。,注意：如果不出現物象或者目標不理想要重找，A.在加油區(qū)之外重找時應按：低倍→高倍→油鏡程序。B.在加油區(qū)內重找應按：低倍→油鏡程序，不得經高倍鏡，以免油沾污鏡頭。,3.顯微鏡使用后的復原：,（1）下降聚光器約1cm，（2）使物鏡離開光軸，使通光孔正隊兩個物鏡中間，提升載物臺至原來位置，（3）把載物臺上的標本移動器移至適當位置，（4）關閉電源。,4、顯微鏡使用的注意事項（1）持鏡時必須是右手握臂、左手托座的姿勢，不可單手提取，以免零件脫落或碰撞到其它地方。（2）輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在實驗臺的邊緣，以免碰翻落地。（3）保持顯微鏡的清潔，光學和照明部分只能用擦鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機械部分用布擦拭。（4）水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和載物臺如果沾污應立即擦凈。,（5）放置玻片標本時要對準通光孔中央，且不能反放玻片，防止壓壞玻片或碰壞物鏡。（6）要養(yǎng)成兩眼同時睜開的習慣，以左眼觀察視野右眼用以繪圖。（7）不要隨意取下目鏡，以防止塵土落入物鏡，也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。（8）使用完畢后，必須復原才能放回鏡箱內。,（二）、體視鏡的使用,體視顯微鏡又稱實體顯微鏡，它在觀察物體時能產生正立的三維空間影像。立體感強，成像清晰和寬闊，又具有長工作距離，并可根據觀察物的特點選用不同的反射和透射光照明，是適用范圍非常廣泛的常規(guī)顯微鏡。,（三）、標本的觀察,“5”字片：低倍人血涂片：低倍高倍油鏡兔精蟲涂片：低倍高倍單層扁平上皮：低倍高倍動、植物細胞有絲分裂切片：低倍高倍日本血吸蟲雌雄合抱裝片：肉眼低倍,,,,,,,（四）、酵母臨時裝片的制作,1.滴一滴鮮酵母液于干凈的載玻片上，2.輕輕蓋上蓋玻片，注意不要產生氣泡，3.低倍、高倍鏡下觀察。注意：觀察時注意光線不要太強，以免影響觀察效果。,（五）生物學繪圖方法：,1.用2H鉛筆繪輪廓，用HB鉛筆描深，線條要光滑，2.圖及文字部分全部用鉛筆，文字用中文楷書，3.繪圖紙上端寫清實驗名稱，中部畫圖，下部寫清所繪圖名稱、放大倍數，4.標明圖中各部分名稱，用直線引線并標在圖的右側，名稱較多時，可先標在右側，再標在左側，5.可用光滑黑點表示明暗不同，不可大面積涂黑。,五、作業(yè)：,1.繪圖：繪出你用油鏡所觀察到的人紅細胞視野圖。2.思考題：（1）總結使用顯微鏡應特別注意的幾個問題。（2）從低倍物鏡轉高倍物鏡時應注意哪幾點？（3）接物鏡上各銘文有何意義？（4）用油鏡觀察和嗣后的操作步驟。為什么要用香柏油作介質？還有哪些可作介質？,（5）鏡檢時，因光線過亮而成像不清晰，怎么辦？（6）為何不能直接用高倍鏡觀察標本？（7）怎樣計算顯微鏡的放大倍數？放大倍數是對長度還是面積而言的？（8）觀察時若發(fā)現視野內有異物，如何確定該異物在目鏡、物鏡、還是在玻片上，如何去除？（9）光學顯微鏡與體視鏡有何不同？（10）制作臨時玻片標本時，如何避免產生氣泡？,