《RB 食品微生物檢測結果質量保證指南 征求意見稿》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《RB 食品微生物檢測結果質量保證指南 征求意見稿（30頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。

ICS中 華 人 民 共 和 國 認 證 認 可 行 業(yè) 標 準RB/T ××××—××××食品微生物檢測結果質量保證指南Guidance for assuring the quality of food microbiology testing results（征求意見稿）××××-××-××發(fā)布 ××××-××-××實施國家認證認可監(jiān)督管理委員會 發(fā)布RBRB/T ××××—××××II目 次前言 ......................................................................................................................................................................III1 范圍....................................................................................................................................................................12 規(guī)范性引用文件................................................................................................................................................13 術語和定義........................................................................................................................................................14 要求.....................................................................................................................................................................24.1 總則..................................................................................................................................................................24.2 質量保證計劃..................................................................................................................................................24.3 質量保證方式..................................................................................................................................................34.4 質量控制頻次.................................................................................................................................................44.5 質量控制時機.................................................................................................................................................44.6 質量保證的實施.............................................................................................................................................64.7 質量保證評價方法.........................................................................................................................................74.8 質量保證結果處理及應用...........................................................................................................................10RB/T ××××—××××III前 言本標準按照GB/T 1.1-2009的規(guī)則起草。本標準由本標準國家認證認可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。本標準由山東出入境檢驗檢疫局檢驗檢驗技術中心、黑龍江出入境檢驗檢疫局檢驗檢驗技術中心、陜西省食藥院、諾安實力可（上海）、天津食品檢驗院、國家風險評估中心、中國合格評定國家認可中心負責起草。本標準主要起草人：雷質文、劉新亮等。RB/T ××××—××××1食品微生物檢測結果質量保證指南1　范圍本標準規(guī)定了食品微生物檢測結果的質量保證計劃、質量保證方式、質量控制頻次、質量控制時機、質量保證的實施、質量保證的評價方法、質量保證的結果應用等要求。本標準適用于食品微生物檢測結果質量保證工作，其他微生物相關的檢驗檢測結果質量保證活動可參考使用。2　規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GBT 27043 《合格評定 能力驗證的通用要求》ISO/TS 22117-2008 《食品和動物飼料微生物學——能力驗證要求和指南》CNAS-RL02 《能力驗證規(guī)則》GB/T 27000 《合格評定 詞匯和通用原則 》JJF 1001 《通用計量術語及定義》GB/T 4883 《數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理和解釋正態(tài)樣本離群值的判斷和處理》GB/T 3358.2 《統(tǒng)計學詞匯及符號 第 2 部分：應用統(tǒng)計》GB 4086.4 《統(tǒng)計分布數(shù)值表 F 分布》GB 4086.4 《統(tǒng)計分布數(shù)值表 F 分布》3　術語和定義3.1 檢測 test按照程序確定合格評定對象的一個或多個特性的活動。[GB/T 27000 定義 4.2]3.2 檢測結果 test result嚴格按照規(guī)定的測量方法所得的特性值。[GB/T 15483.1 定義 3.5]3. 3 質量保證 quality assuranceRB/T ××××—××××2獨立于試驗研究，旨在保證試驗機構遵循良好實驗室規(guī)范準則的體系（包括人員） 。[WS/T 455-2014 定義 2.4.7.4]3.4 實驗室內比對 intralaboratory comparison按照預先規(guī)定的條件，在同一實驗室（3.6）內部對相同或類似的物品進行測量或檢測的組織、實施和評價。[源自: ISO/IEC 17025:2017, 3.4]3.5 實驗室間比對 interlaboratory comparison按照預先規(guī)定的條件，由兩個或多個實驗室對相同或類似的物品進行測量或檢測的組織、實施和評價。[源自: ISO/IEC 17043:2010, 3.4]3.6 能力驗證 proficiency testing利用實驗室間比對，按照預先制定的準則評價參加者的能力。[源自: ISO/IEC 17043:2010, 3.4]3.7 標準物質 reference material具有足夠均勻和穩(wěn)定的特定特性的物質，其特性被證實適用于測量中或標稱特性檢查中的預期用途。[JJF 1001-2011 定義 8.14]3.8 有證標準物質 certified reference material(CRM)附有由權威機構發(fā)布的文件，提供使用有效程序獲得的具有不確定度和溯源性的一個或多個特性量值的標準物質。[JJF 1001-2011 定義8.15]4. 要求4.1 總則4.1.1 食品微生物檢測實驗室應制定質量控制程序，對質量控制計劃、質量控制方式、質量控制時機、質量控制頻次、質量控制評價、質量控制結果應用等進行規(guī)定，保證檢測結果的有效性。4.1.2 食品微生物檢測結果質量保證包括內部質量控制和外部質量評估兩種方式，食品微生物檢測實驗室應根據(jù)檢測實際情況確定適當?shù)馁|量保證方式。4.1.3 食品微生物檢測實驗室應分析并使用監(jiān)控活動的數(shù)據(jù)，控制和改進實驗室活動，如果RB/T ××××—××××3發(fā)現(xiàn)監(jiān)控活動數(shù)據(jù)分析結果超出預定的數(shù)據(jù)時，應采取適當措施防止報告錯誤結果。4.2 質量保證計劃4.2.1 食品微生物檢測實驗室應根據(jù)實際工作的需要制定檢測結果質量保證計劃，計劃應包括質量控制項目、參加人員、實施日期、檢測方法、評價方法、不合格質量控制結果整改的技術方案等。4.2.2 檢測結果質量保證計劃應體現(xiàn)微生物檢測實驗室的特點，計劃應盡可能覆蓋所開展的食品微生物項目和全體檢測人員，尤其是對于檢測需求少頻次低的項目。4.2.3 食品微生物檢測結果質量保證計劃經(jīng)應實驗室管理層審批。如果在執(zhí)行過程中出現(xiàn)任何原因導致的質量保證計劃無法執(zhí)行或需要修改的情況，計劃原編制人需向技術負責人提出申請，經(jīng)實驗室管理層審批通過后，方可修改原質量編制計劃。4.2.4 食品微生物檢測實驗室室制定內部質量保證計劃時應考慮以下因素：a）檢測業(yè)務量；b）檢測結果的用途；c）檢測方法本身的穩(wěn)定性與復雜性；d）對技術人員經(jīng)驗的依賴程度；e）參加外部比對（包含能力驗證）的頻次與結果；f）人員的能力和經(jīng)驗、人員數(shù)量及變動情況；g）新采用的方法或變更的方法。4.2.5 食品微生物檢測實驗室制定外部質量評估計劃除應考慮制定內部質量保證計劃涉及的因素外，還應考慮以下因素：a）內部質量控制結果；b）實驗室間比對（包含能力驗證）的可獲得性；c）CNAS 客戶和管理機構對實驗室間比對（包含能力驗證）的要求。4.3 質量保證方式4.3.1 食品微生物檢測結果的質量保證通常采用一種或幾種方式的組合，微生物檢測結果的質量保證方式包括但不限于：a）使用標準菌（毒）株監(jiān)控結果的準確性；b）使用添加已知水平的加標樣品，包括目標和背景微生物；c）使用不同基質的添加或自然污染的樣品；RB/T ××××—××××4d）檢測標準規(guī)定的質量保證方法，如重復性和再現(xiàn)性值；e）實驗室內比對，如人員比對、方法比對、儀器設備比對、留樣再測；f）平行樣品的測定/涂布平板；g）平行樣品的測定/系列稀釋；h）平行樣品的測定/平板或 MPN 結果的讀取；i）加標樣品定性檢測；j）盲樣測試；k）能力驗證；l）測量審核；m）實驗室間比對。4.3.2 在實施人員比對、方法比對和設備比對時，應選取均勻性和穩(wěn)定性符合要求的樣品進行。4.4 質量控制頻次4.4.1 食品微生物檢測實驗室內部質量控制包括對實驗室所有工作的連續(xù)評估，質量控制頻次應與實驗室開展的實驗性質、實驗頻率、質量控制方式相關。4.4.2 食品微生物內部質量控制頻次應統(tǒng)籌考慮定期內部質量控制、日常內部質量控制及臨時內部質量控制三種情況。對定量檢測項目來說，定期內部質量控制頻次建議 6 次/年；對定性檢測項目來說，定期內部質量控制頻次建議 4 次/年。日常內部質量控制頻次建議每批或每組樣品以 5％或每 20 個樣品 1 次的頻次進行內部質量控制。臨時內部質量控制頻次根據(jù)實際情況而定。4.4.3 食品微生物檢測能力驗證的頻次依據(jù) CNAS-RL02 《能力驗證規(guī)則》執(zhí)行。對沒有能力驗證的領域，實驗室應有其他措施來確保結果的準確性和可靠性。4.5 質量控制時機4.5.1 食品微生物檢測結果實施內部質量控制時，應掌握時機，確保檢測結果質量保證的有效性。4.5.2 人員比對的時機，適用于：a）依靠檢測人員主觀判斷較多的項目,例如菌落的識別、血清凝集等；b）在培員工和新上崗的員工；c）檢測過程的關鍵控制點或關鍵控制環(huán)節(jié)；RB/T ××××—××××5d）操作難度大的項目和或者樣品；e）檢測結果在臨界值附近；f）新安裝的設備；g）新開驗的檢測項目。4.5.3 方法比對優(yōu)先適用于以下情況：a）剛實施的新標準或者新方法；b）引進的新技術、新方法和研制的新方法；c）已有的具有多個檢驗標準或方法的項目。4.5.4 設備比對試驗適用于：a）新安裝的設備；b）修復后的設備；c）檢測結果出現(xiàn)在臨界值附近的設備。4.5.5 留樣再測適用于：a）驗證檢測結果的準確性；b）驗證檢測結果的重復性；c）對留存樣品特性的監(jiān)控。4.5.6 實驗室開展臨時內部質控的時機，包括但不僅限于：a）新人員（在培人員、新上崗人員、短期聘用人員等）培訓或新上崗時；b）新項目（新擴項的項目）開驗時，或對認可周期內很少從事檢測已獲認可的特殊項目需通過內部質控證明該能力得以維持時；c）新設備（新進設備初期使用階段）開測時；d）新標準（包括標準變更后）時；e）客戶有特殊要求時；f）比對試驗（包括參加能力驗證計劃）時； g）檢測結果處于限量值附近時；h）質量仲裁時；i）客戶投訴（抱怨）時；j）發(fā)生偏離時（顧客要求或實驗室需要時）等。4.6 質量保證的實施RB/T ××××—××××64.6.1 食品微生物檢測結果的質量保證計劃經(jīng)審批后，實驗室應根據(jù)實際情況制定質量保證實施方案，確保質量保證計劃實施的規(guī)范性、有效性。4.6.2 內部質量控制制定實施方案時，至少應包括：a）試驗過程，如時間、人員、項目、儀器設備、環(huán)境條件、標準/依據(jù)、樣品制備過程、樣品均勻性及穩(wěn)定性情況。b）試驗結果，如記錄格式、統(tǒng)計計算方案、評定準則、結果評價、異常結果處理措施。c）實施方式，如常規(guī)實驗、留樣再測、人員比對、方法比對、使用標準物質、加標回收、設備比對、其他方式等。4.6.3 實施比對試驗時， 要選取均勻性和穩(wěn)定性符合要求的樣品進行。實施比對試驗前的參考方案內容：a）比對試驗預期開始時間和預期結束時間；b）比對試驗的目的、比對項目內容和試驗實施方案；c）比對試驗所采用的檢測方法和技術要求；d）比對試驗所制定的試驗用儀器、設備（需要指定時） ；e）比對試驗時規(guī)定的重復（獨立）測量的次數(shù)；f）比對試驗所用樣品的有關描述、發(fā)放形式和處置要求；g）比對試驗所用樣品的均勻性和穩(wěn)定性評估及評估結論；h）需要記錄的可能與試驗結果相關的背景信息，如比對環(huán)境條件、標準品及其相關信息；i）比對試驗結果的記錄形式和試驗數(shù)據(jù)的記錄格式；j）比對試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計計算分析方案；k）比對試驗結果的評價方案；l）比對試驗結果的技術分析；m）其他需要特殊注意的事項。4.6.4 食品微生物檢測制定外部質量評估計劃后，應及時通過各種方式聯(lián)系能力驗證提供者報名，確定參加能力驗證的主要方法和作證方法，準備能力驗證物品（包括質控菌株）和儀器設備，必要時通過內部質量控制方法，確保參加能力驗證的主要方法和作證方法的有效性。4.6.5 實驗室選擇能力驗證提供者時，應符合 ISO17043 的要求，并按照以下順序參加：RB/T ××××—××××71) CNAS 認可的能力驗證提供者（PTP）以及已簽署 PTP 相互承認協(xié)議（MRA）的認可機構認可的 PTP 在其認可范圍內運作的能力驗證計劃； 2) 未簽署 PTP MRA 的認可機構依據(jù) ISO/IEC 17043 認可的 PTP 在其認可范圍內運作的能力驗證計劃； 3) 國際認可合作組織運作的能力驗證計劃，例如：亞太實驗室認可合作組織（APLAC）等開展的能力驗證計劃； 4) CNAS 組織的能力驗證計劃； 5) 與 CNAS 簽署互認協(xié)議的認可機構組織的能力驗證計劃； 6) 國際權威組織實施的實驗室間比對，例如：國際計量委員會（CIPM） 、亞太計量規(guī)劃組織（APMP） 、世界反興奮劑聯(lián)盟（ WADA）等開展的國際、區(qū)域實驗室間比對； 7) 依據(jù) ISO/IEC 17043 獲準認可的 PTP 在其認可范圍外運作的能力驗證計劃； 8) 行業(yè)主管部門或行業(yè)協(xié)會組織的實驗室間比對； 9) 其他機構組織的實驗室間比對。4.6.6 實驗室間比對的實施方案要同 4.6.3 比對試驗方案要求。4.7 質量保證評價方法4.7.1 內部質量控制評價方法4.7.1.1 當食品微生物檢測方法中規(guī)定了質量控制要求時，實驗室應利用和參考微生物檢測標準規(guī)定的質量控制要求進行評價，評價指標包括重復性限、再現(xiàn)性限、回收率等。a) 利用微生物檢測標準規(guī)定的重復性限 r 進行統(tǒng)計評價時，食品微生物檢測質量控制結果的重復性標準偏差應小于標準規(guī)定的重復性限 r。b) 利用微生物檢測標準規(guī)定的室內再現(xiàn)性限 R 進行統(tǒng)計評價時，食品微生物檢測質量控制的再現(xiàn)性標準偏差應小于再現(xiàn)性標準偏差限 R。c) 利用微生物檢測標準規(guī)定的加標回收率進行統(tǒng)計評價時，在所有菌株的 3 次獨立平行試驗中，稀釋液組的菌回收率均應不低于 70%，如樣品組的菌回收率亦均不低于 70%，則所采用的微生物檢驗方法適合該樣品。如任 1 次試驗中樣品組的菌回收率低于 70%，則應采用合適的方法消除樣品的抑菌活性，并重新進行方法驗證。4.7.1.2 當使用質控樣品進行微生物檢測結果的內部質量控制時，利用微生物質控樣品的定值進行統(tǒng)計分析及評價。a) 利用質控樣品的定值直接進行統(tǒng)計分析及評價RB/T ××××—××××8實驗室完全按照利用所購商業(yè)微生物質控樣品說明書所規(guī)定測試條件（包括培養(yǎng)基、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度等）以及作業(yè)流程進行操作的情況下，對于定性檢測，如果實驗室的結果與本底一致，則可認為實驗室內部質控有效，否則無效；對于定量檢測，實驗室的結果落在商業(yè)微生物質控樣品說明書上的預測區(qū)間滿意值范圍內，則可認為實驗室內部質控有效，否則無效。b) t 檢驗法進行統(tǒng)計分析及評價（1）實驗室測試結果平均值 與所購商業(yè)微生物質控樣品的參考值 進行比較?? ??0嚴格按照所購商業(yè)微生物質控樣品說明書所規(guī)定的測試條件（包括培養(yǎng)基、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度等）以及作業(yè)流程進行測試，此時可使用 t 檢驗法進行統(tǒng)計分析及評價實驗室測試結果平均值與所購商業(yè)微生物質控樣品的參考值 的差異。??0??=?????0??/ ??式中， 為實驗室 n 次測試結果的平均值， 為所購商業(yè)微生物質控樣品的參考值，s?? ??0為測值標準差給出顯著性水平 ， 一般取 0.05。根據(jù)自由度 ，顯著性水平 ，由 t 表查出??=???1值。 若 ,表示實驗室測試結果平均值 與所購商業(yè)微生物質控樣品的參考??1???2(??) ??1，表明測量結果的質量失控，必須查找原因并迅速采取糾正措施；RB/T ××××—××××9臨界預防段判據(jù)：0.780%，大腸桿菌>70%重復性限（r）大腸桿菌 r=0.046，大腸桿菌 r=0.035ISO 9308-1-2014《水質 大腸桿菌和大腸菌群計數(shù) 第 1 部分 低菌群水的膜過濾法》 再現(xiàn)性限（R）大腸桿菌 R=0.127,大腸桿菌 R=0.114①Chromogenic 大腸菌群顯色培養(yǎng)基;②定量測試范圍 10 至100CFUISO 7218：2007《食品和動物飼料微生物學 微生物檢驗通則和通用要求》MPN 法：95%可信限附錄 b.1~b.4 規(guī)定了單稀釋系列時 95%可信限；附錄b.1~b.4 規(guī)定了多稀釋系列（3×3 管或 5×5 管）時95%可信限。ISO/TS 22117-2010 《食品和動物飼料中微生物－能力驗證特定要求和指南》條款 8.3.7.5MPN如果能力驗證計劃或其所依據(jù)的法規(guī)需要通過2 個平行測試以確定 MPN值，則可以比較結果，并且如果管組合可信，那么兩個結果之間應該沒有差異。如有差異，以 log10 單位，對于 3×5 管法兩個結果之間的差異不應超過，2.58× 2×0.24=0.88對于 3×3 管法兩個結果之間的差異不應超過。2.58× 2×0.32=1.17如果比較兩個分布，每個分布做 2 個平行測試，則兩個平均值應該沒有差異，如有差異，以 log10 單位，對于 3×5 管法兩個結果之間的差異不應超過2.58×0.24 = 0.62，對于3×3 管法兩個結果之間的差異不應超過 2.58×0.32 = 0.83。RB/T ××××—××××18B B附　錄　B（資料性附錄）B.1　格拉布斯檢驗、F檢驗、t檢驗是處理和評價比對試驗樣品均勻性和穩(wěn)定性數(shù)據(jù)處理最基本的方法，三者缺一不可，順序不能顛倒。格魯布斯檢驗剔除離散值，保證數(shù)據(jù)統(tǒng)計結果的有效、準確，是F檢驗、t檢驗的基礎；F檢驗的目的在于比較兩組數(shù)據(jù)精密度也即隨機誤差是否存在顯著性差異；t檢驗的目的在于說明兩組數(shù)據(jù)平均值的準確度，是一切試驗根本目的所在。 B.2　格拉布斯（Grubbs）檢驗法（限定檢出離群值的個數(shù)不超過 1 時）B.2.1　將n個測定值自小到大排列成X 1，X 2，X 3 ，......X n ，設X 1或X n為被檢驗的可疑值(即觀察列中的最小值或最大值)。B.2.2　計算統(tǒng)計量G值若可疑值出現(xiàn)在首項，則：??1=?????1??若可疑值出現(xiàn)在末項，則：????=???????????=??∑??=1(???????)???1——實 驗 室 對 某 一 濃 度 水 平 樣 品 測 試 的 平 均 值 ；??S——實 驗 室 對 某 一 濃 度 水 平 樣 品 測 試 的 標 準 偏 差 ；給出顯著性水平α，α一般取0.05。查GB/T 4883-2008 表A.2 格拉布斯檢驗的臨界值表，查相應顯著水α和測定次數(shù)n時的臨界值G 0.95。當 （或 ） G0.95時，判定 （ 或 ） 為 離 群 值 ； 否 則 判 未 發(fā) 現(xiàn) （ 或 ） 是 離 群??1 ???? > ??1 ???? ??1 ????值 。對 于 檢 出 的 離 群 值 確 定 剔 除 水 平 ， 一般取0.01。查GB/T 4883-2008表A.2 格拉布??? ???斯檢驗的臨界值表，查相應顯著水α和測定次數(shù)n時的臨界值G 0.99。當 （或 ） G0.99時，判定 （ 或 ） 為 統(tǒng) 計 離 群 值 ； 否 則 判 未 發(fā) 現(xiàn) （ 或 ） 是??1 ???? > ??1 ???? ??1 ????統(tǒng) 計 離 群 值 。B.3　微生物實驗室間比對試驗統(tǒng)計分析示例本示例以某次乳粉中菌落總數(shù)測定實驗室間比對試驗為例。B.3.1　均勻性檢驗RB/T ××××—××××19實驗室間比對試驗樣品（凍干粉）分裝后隨機抽取 10 個樣品，每個樣品重復測試 2 次，測定結果見表 B.1。表 B.1　菌落總數(shù)測試結果（CFU/g）測試次數(shù)樣品號測試結果 1x測試結果 2x對數(shù)轉換值1對數(shù)轉換值2x1 50000 42000 4.699 4.6232 53000 51000 4.724 4.7083 60000 54000 4.778 4.7324 47000 40000 4.672 4.6025 50000 56000 4.699 4.7486 43000 51000 4.633 4.7087 45000 48000 4.653 4.6818 46000 52000 4.663 4.7169 48000 47000 4.681 4.67210 43000 50000 4.699 4.623總平均值 4.685單因子方差分析結果見表 B.2。表 B.2　方差分析結果方差來源 自由度 平方和 ???? 均方 ???? F樣品間 9 0.023 0.0025樣品內 10 0.015 0.00151.67臨界值 。計算的 值為 1.67， ＜ ，這初步表明在?? ??0.05(9,10)=3.02 ?? ?? ??0.05(9,10)=3.020.05 顯著性水平時，樣品中的細菌分布是均勻的。也可利用 準則，計算樣品之間的不均勻性標準差 為 0.022。以經(jīng)驗值 0.25????≤0.3?? ????為能力評定標準差 ， ，滿足 準則的要求，可判斷樣品中的細菌分布?? 0.3??=0.075 ????≤0.3??是均勻的。 注：F 分布表參考GB 4086.4-1983 統(tǒng)計分布數(shù)值表F分布。B.3.2　穩(wěn)定性檢驗從總體樣品中隨機抽取 5 瓶進行穩(wěn)定性檢驗，將其均勻性檢驗數(shù)據(jù)作為穩(wěn)定性檢驗的第一次測試數(shù)據(jù)。模擬運輸條件放置 30 天后進行第二次測試。每個樣品在重復條件下測試RB/T ××××—××××20兩次。測試結果見表 B.3。表 B.3　放置 30 天后測試結果（CFU/g）測試結果樣品號第 1 次 第 2 次 第 1 次對數(shù)值 第 2 次對數(shù)值1 42000 44000 4.623 4.6432 48000 50000 4.681 4.6993 45000 50000 4.653 4.6994 51000 49000 4.708 4.6905 56000 53000 4.748 4.724統(tǒng)計分析結果見表 B.4 。表 B.4　t 檢驗分析結果1x2x1s2s1n2t4.685 4.687 0.045 0.038 20 10 0.12在 0.05 顯著水平下，自由度為 28 的臨界值 為 2.05。根據(jù)公式計算可知 值為0.5(28)t t0.12，小于臨界值。第 2 次檢測值與第 1 次檢測值無顯著差異，說明樣品中細菌是穩(wěn)定存活的。也可利用 準則，計算均勻性檢驗和穩(wěn)定性檢驗總平均值的差值|???