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1、ph causes non-autonomous overgrowth in mosaic eyes 主要技術手段： MARCM技術 TUNEL法 MARCM技術如果想在嵌合體中敲除基因，用FLP/FRT系統(tǒng) 如果想在嵌合體中增加基因表達，用UAS/Gal4系統(tǒng) UAS/Gal4系統(tǒng)GAL4/UAS系 統(tǒng) 是 一 種 轉 基 因 體 系 。原 理 ： 利 用 特 定 的 啟 動 子 或 增 強 子 ， 以 組 織 特 異 性 的 方 式 激 活 酵 母 轉 錄 激 活 子 GAL4的 表 達 ， GAL4又 以 同 樣 的 方 式 引 起 GAL4反 映 元 件 （ UAS） -靶 基 因 的

2、 轉 錄 。 GAL4 UAS UAS/Gal4系統(tǒng) FLP/FRT 系統(tǒng)果 蠅 含 有 四 對 染 色 體 ， 每 對 染色 體 中 的 一 條 被 稱 為 同 源 染 色體 ， 分 別 來 自 于 母 本 和 父 本 。在 正 常 的 細 胞 分 裂 中 ， 一 對 同源 染 色 體 總 是 能 忠 誠 地 復 制 ， 然 后 分 配 到 新 分 裂 的 細 胞 中 FLP是一個來自酵母的染色體重組酶FRT則是FLP催化的一段DNA序列 同 源 重 組 產 生 會 兩 個 子 細 胞 中 ，一 個 含 有 雙 份 正 常 染 色 體 ， 令 一個 含 有 雙 份 突 變 染 色 體 。如

3、果 我 們 在 正 常 染 色 體 上 添 加 標示 （ GFP） ， 那 么 ， 可 以 在 果 蠅組 織 中 觀 察 突 變 細 胞 的 表 型 變 化 如 果 兩 條 染 色 體 中 的 一 條 是 正 常 的 ， 而 另 一 條 基 因 被 突 變 掉 ，那 么 對 于 絕 大 部 分 沒 有 重 組 的 細 胞 來 說 ， 它 們 是 “ 雜 合 體 ” 。FLP/FRT 系統(tǒng) MARCM 技術(mosaic analysis with a repressible cell marker )同源 染色體重組非同源染色體組合GAL80UAS/GFP/mutation突變細胞 TUNEL

4、法 DNA片段化與檢測細 胞 凋 亡 中 染 色 體 DNA的 斷 裂 是 個漸 進 的 過 程 ， 染 色 體 DNA首 先 在 核酸 內 切 酶 作 用 下 ， 隨 機 切 斷 ；在 核 小 體 單 位 之 間 被 隨 機 切 斷 。 形成 180-200bp核 小 體 式 片 段 ；DNA雙 鏈 斷 裂 出 現(xiàn) 缺 口 即 可 產 生 一系 列 DNA的 3 -OH末 端 ， 被 染 色 。 增加細胞膜通透性 TdT 酶和熒光素標記 的dUTP進入細胞在TdT酶的輔助下dUTP與凋亡細胞中斷裂DNA的3-OH末端結合 HRP標記的抗熒光 素抗體特異結合HRP底物，H2O2發(fā)生氧化、環(huán)化反應，形成棕褐色 顯微鏡下觀察TUNEL法 DNA片段化與檢測 TUNEL法 DNA片段化與檢測