Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,,?#?,*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級,第三級,第四級,第五級,,,高中生物競賽(jìngsài)精英教案細(xì)胞生物學(xué)第一節(jié)課件,第一頁，共32頁。,二、細(xì)胞生物學(xué)的主要研究內(nèi)容,大致可分為以下幾 個方面：,(一)細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究,(二)生物膜與細(xì)胞器的研究,(三)細(xì)胞骨架體系的研究,(四)細(xì)胞增殖及其調(diào)控,（五)細(xì)胞分化(fēnhuà)及其調(diào)控,(六)細(xì)胞的衰 老與程序死亡,(七)細(xì)胞的起源進(jìn)化,(八)細(xì)胞工程,第二頁，共32頁。,三、當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究的總體趨勢與重點領(lǐng)域,（一）當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究中的三大基本問題,1、細(xì)胞內(nèi)的基因組是如何在時間(shíjiān)與空間上有序表達(dá)的？,2、基因表達(dá)的產(chǎn)物如何逐級裝配成基本結(jié)構(gòu)體系及各種細(xì)胞器？,3、基因表達(dá)的產(chǎn)物如何調(diào)節(jié)細(xì)胞最重要的生命活動過程的？,第三頁，共32頁。,,（二）當(dāng)前細(xì)胞基本生命活動研究(yánjiū)的若干重大課題,1、染色體DNA與蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系——主要是非組蛋白對基因組的作用。,2、細(xì)胞增殖、分化、凋亡（程序性死亡）的相互關(guān)系及調(diào)控,3、細(xì)胞信號傳導(dǎo)的研究(yánjiū),4、細(xì)胞結(jié)構(gòu)體系的裝配,第四頁，共32頁。,一、細(xì)胞的發(fā)現(xiàn),英國學(xué)者胡克于1665年制造了第一臺有科研價值的顯微鏡，第一次描述了植物細(xì)胞的構(gòu)造，細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)是在1665年。1677—1683年，荷蘭人列文胡克用自己設(shè)計好的顯微鏡第一次觀察到活細(xì)胞。,二、細(xì)胞學(xué)說的建立及其意義,1、建立： 1838—1839年德國植物學(xué)家施萊登和動物學(xué)家施旺提出：一切植物、動物都是由細(xì)胞組成的，細(xì)胞是一切動植物的 基本單位，這就是著名的“細(xì)胞學(xué)說”。,2、細(xì)胞學(xué)說的基本內(nèi)容：①一切有機(jī)體都是由細(xì)胞發(fā)育而來的，并由細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)物所構(gòu)成；②每個細(xì)胞是一個相對獨立的單位，執(zhí)行特定的功能；③細(xì)胞只能(zhī nénɡ)通過細(xì)胞分裂而來。,第二(dì èr)講 細(xì)胞概述,第五頁，共32頁。,（一）細(xì)胞的概念：細(xì)胞是生命活動的基本單位,細(xì)胞是有膜包圍的能進(jìn)行獨立繁殖的最小原生質(zhì)團(tuán)，簡單地說細(xì)胞是生命活動的基本單位?？梢詮囊韵陆嵌热ダ斫猓孩偌?xì)胞是構(gòu)成有機(jī)體的基本單位；②細(xì)胞是 有 是代謝與功能的基本單位，有嚴(yán)格自動控制的代謝體系，并且(bìngqiě)有保證完成生命過程有序性的獨立的結(jié)構(gòu)裝置。③有機(jī)體的生長發(fā)育是依靠細(xì)胞增殖、分化與凋亡來實現(xiàn)的。細(xì)胞是有機(jī)體生長發(fā)育的基礎(chǔ)；④細(xì)胞具有遺傳的全能性（除少數(shù)特化細(xì)胞），是遺傳的基本單位。,（二）細(xì)胞的基本共性,細(xì)胞的基本共性有：①所有細(xì)胞都有細(xì)胞膜；②所有細(xì)胞都有DNA與RNA；③細(xì)胞都有核糖體；④細(xì)胞都以一分為二(yī fēn wéi èr)的方式分裂增殖。,,,三、 細(xì)胞(xìbāo),第六頁，共32頁。,（三）細(xì)胞(xìbāo)的種類,a、特點: ①無典型的細(xì)胞核，遺傳物質(zhì)僅由一個裸露的環(huán)狀DNA構(gòu)成； ②細(xì)胞內(nèi)沒有(méi yǒu)分化出以膜為基礎(chǔ)的細(xì)胞器與細(xì)胞核膜。,1、種類繁多的細(xì)胞(xìbāo)可以分為原核細(xì)胞(xìbāo)、古核細(xì)胞(xìbāo)與真核細(xì)胞(xìbāo)。,2,、原核細(xì)胞,b,、種類：大約出現(xiàn)在,35,億年前,，包括支原體、衣原體、立克次體、細(xì)菌、放線菌及藍(lán)藻,(,藍(lán)細(xì)菌,),等,6,類。,支原體：,支原體是目前發(fā)現(xiàn)的最小、最簡單的細(xì)胞,，直徑只有,0.1~0.3µm,,能在體外生長，也能寄生在細(xì)胞內(nèi)。,第七頁，共32頁。,細(xì)菌,（1）形態(tài)：球菌、桿菌、螺旋菌。,（2）核 區(qū)與基因(jīyīn)：,一個環(huán)狀的DNA分子盤繞在核區(qū)，沒有或有極少的組蛋白，無明顯的Feulgen（福爾根）反應(yīng)。DNA復(fù)制不受細(xì)胞分裂周期的限制，可以連續(xù)進(jìn)行，且DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)翻譯可以同時進(jìn)行,這是細(xì)菌乃至整個原核細(xì)胞與真核細(xì)胞最顯著的差異之一。,,（3）細(xì)菌(xìjūn)細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)：,主要指細(xì)胞膜、細(xì)胞壁及其特化結(jié)構(gòu)(中膜體、莢膜、鞭毛等)。細(xì)胞膜是細(xì)胞表面的重要結(jié)構(gòu)。,第八頁，共32頁。,細(xì)胞膜的功能包括：①選擇性地物質(zhì)運輸；②細(xì)菌細(xì)胞膜有,豐富的酶系，執(zhí)行重要的代謝功能。,中膜體由細(xì)胞膜內(nèi)陷形成，可能起DNA復(fù)制的支點作用(zuòyòng),細(xì)胞壁的共同成分是肽聚糖 ，革蘭氏陽性菌與陰性菌細(xì)胞,壁成分與結(jié)構(gòu)差異明顯。,莢 膜是某些細(xì)菌表面的特殊結(jié)構(gòu)，是位于細(xì)胞壁表面的,一層粘液物質(zhì)。,鞭 毛是某些細(xì)菌的運動器官，結(jié)構(gòu)簡單,第九頁，共32頁。,（4）細(xì)菌細(xì)胞(xìbāo)的核糖體,核糖體的沉降系數(shù)為70S，由50S大亞單位和30S亞單位組成。大亞單位含有23S rRNA, 5S rRNA和30多種蛋白質(zhì)，對紅霉素與氯霉素敏感；小亞單位含有16S RNA與20多種蛋白質(zhì)，對四環(huán)素與鏈霉素敏感。,（5）細(xì)菌細(xì)胞擬核外DNA,擬核外DNA：質(zhì)粒。裸露的環(huán)狀DNA，能自我復(fù)制(fùzhì)，并可整合到核DNA中。,（6）細(xì)菌細(xì)胞的內(nèi)生孢子,又稱芽孢，是對不良環(huán)境有強(qiáng)抵抗力的休眠體。是細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的重要(zhòngyào)物質(zhì)(特別是DNA)，積聚在細(xì)胞的一端，形成致密體，可度過惡劣環(huán)境。,第十頁，共32頁。,藍(lán)藻,又稱藍(lán)細(xì)菌，是原核生物，又是最簡單(jiǎndān)的自養(yǎng)植物類型之一。,藍(lán)藻含有豐富的色素，可進(jìn)行類似高等植物的光合作用。,其中央相當(dāng)于細(xì)菌的核區(qū)；光合作用片層由藻膽蛋白構(gòu)成，作用是將光能傳遞給葉綠素a；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含物有的是儲存的養(yǎng)料，有的功能不詳；細(xì)胞膜外有細(xì)胞壁和膠質(zhì)層(鞘)。,,第十一頁，共32頁。,,c、原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的比較,原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的根本區(qū)別：①細(xì)胞膜系統(tǒng)的分化演變；②遺傳信息量與遺傳裝置的擴(kuò)增與復(fù)雜化。由于(yóuyú)上述的根本差異，真核細(xì)胞的體積也相應(yīng)擴(kuò)增，細(xì)胞內(nèi)部出現(xiàn)精密的網(wǎng)架結(jié)構(gòu)——細(xì)胞骨架。,二者的區(qū)別可分為兩部分進(jìn)行比較：,①結(jié)構(gòu)與功能比較：真核細(xì)胞的生物膜將細(xì)胞分化為核與質(zhì)兩部分，細(xì)胞質(zhì)又分化出各種細(xì)胞器，細(xì)胞骨架又保證了細(xì)胞形態(tài)的合理排布與執(zhí)行功能的有序性,,②細(xì)胞遺傳裝置與基因表達(dá)方式的比較：核膜使擴(kuò)增了的遺傳信息與復(fù)雜的遺傳裝置相對獨立 ，使基因表達(dá)的程序有嚴(yán)格的階段性與區(qū)域性。,第十二頁，共32頁。,古細(xì)菌（又稱原細(xì)菌）是一些生長在極端特殊環(huán)境中（高溫或高鹽）的細(xì)菌。最早發(fā)現(xiàn)的是產(chǎn)甲烷細(xì)菌類。,古核細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、遺傳裝置雖與原核細(xì)胞相似，但一些 基本分子生物學(xué)特點又與真核細(xì)胞接近?，F(xiàn)已有更多的論據(jù)說明真核生物可能起源于古核生物，論據(jù)如下：,（1）古細(xì)菌的細(xì)胞壁成分與真核細(xì)胞一樣；,（2）古核細(xì)胞DNA中有重復(fù)序列的存在；,（3）具有組蛋白；,（4）古核細(xì)胞的核糖體與真細(xì)菌的差異很大，從對抗生素的反應(yīng)看，應(yīng)更類似真核細(xì)胞的核糖體.,（5）根據(jù)對5SrRNA的分子進(jìn)化分析和二級結(jié)構(gòu)的研究(yánjiū)，認(rèn)為古細(xì)菌與真核生物同屬一類。而真細(xì)菌卻與之差別甚遠(yuǎn)。,3、古核細(xì)胞(xìbāo)（古細(xì)菌）,第十三頁，共32頁。,4,、真核細(xì)胞,1）、真核細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)(jiégòu)體系,①生物膜系統(tǒng),細(xì)胞表面是一種多功能結(jié)構(gòu)(jiégòu)；核膜又把細(xì)胞分為細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核。,以生物膜系統(tǒng)為基礎(chǔ)形成了各種細(xì)胞器。線粒體、葉綠體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體及溶酶體等。,②遺傳信息表達(dá)結(jié)構(gòu)(jiégòu)系統(tǒng),由 DNA—蛋白質(zhì)與 RNA—蛋白質(zhì)復(fù)合體形成的遺傳信息載體與表達(dá)系統(tǒng)，一般以顆?；蚶w維狀的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)(jiégòu)存在。包括染色質(zhì)，核 仁、核糖體等。,③細(xì)胞骨架系統(tǒng),細(xì)胞骨架由特異的結(jié)構(gòu)(jiégòu)蛋白質(zhì)構(gòu)成網(wǎng)架系統(tǒng)，可分為胞質(zhì)骨架與核骨架。,,第十四頁，共32頁。,,2）、細(xì)胞大小及其分析,細(xì)胞體積的守恒(shǒu hénɡ)規(guī)律。,3）、細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,細(xì)胞的形態(tài)與功能具有相關(guān)性與一致性。,4）、植物細(xì)胞與動物細(xì)胞的比較,植物細(xì)胞特有的細(xì)胞結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁（主要成分是纖維素）、液泡、葉綠體等； 而動物細(xì)胞的中心粒在植物細(xì)胞中不常見到。,第十五頁，共32頁。,（1）病毒的基本知識,病毒是由一個核酸分子(DNA或RNA)與蛋白質(zhì)構(gòu)成的非細(xì)胞形態(tài)的生命體。類病毒僅由一個有感染性的RNA構(gòu)成。朊病毒僅由有感染性的蛋白質(zhì)構(gòu)成。病毒是完整的寄生物。,根據(jù)核 酸類型不同，病毒 可分為(fēn wéi)DNA病毒與RNA病毒。依據(jù)宿主可分為(fēn wéi)動物病毒、植物病毒和細(xì)菌病毒（噬菌體）等。,5、非細(xì)胞形態(tài)的生命體——病毒(bìngdú)及其與細(xì)胞的關(guān)系,（2）病毒在細(xì)胞內(nèi)的增殖(zēngzhí)（復(fù)制）,病毒的增殖(zēngzhí)又稱病毒的復(fù)制，病毒的增殖(zēngzhí)必須在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行。,病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)分別復(fù)制病毒核酸與翻譯病毒蛋白，然后將核酸與蛋白裝配成病毒的基本結(jié)構(gòu)。其復(fù)制過程大到可分為：,侵染，脫去衣殼，早基因的復(fù)制與表達(dá)，晚基因的復(fù)制、結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的合成，裝配、成熟與釋放等過程。,第十六頁，共32頁。,去壁的常用(chánɡ yònɡ)方法：,古核細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、遺傳裝置雖與原核細(xì)胞相似，但一些 基本分子生物學(xué)特點又與真核細(xì)胞接近。,第四講 細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作(cāozuò)技術(shù),分辨率是指顯微鏡區(qū)分開相近(xiānɡ jìn)兩點的能力。,λ為光源波長(bōcháng)，α為物鏡鏡口角 。,②可在真空、大氣、液體等條件下工作；,如蛋白分泌(fēnmì)的研究、胞內(nèi)酶的研究、一些結(jié)構(gòu)蛋白的研究。,病毒可能是細(xì)胞在特定條件下“扔出”的一個基因組，或者(huòzhě)是具有復(fù)制與轉(zhuǎn)錄能力的mRNA。,以生物膜系統(tǒng)為基礎(chǔ)形成了各種細(xì)胞器。,電鏡的分辨率常常是超薄切片厚度(hòudù)的1/10，它的分辨率可達(dá)0.,（二）主要電鏡制樣技術(shù)介紹,（3）、病毒與細(xì)胞在起源和進(jìn)化中的關(guān)系,②遺傳信息量與遺傳裝置的擴(kuò)增與復(fù)雜化。,（五)細(xì)胞分化(fēnhuà)及其調(diào)控,②細(xì)胞是 有 是代謝與功能的基本單位，有嚴(yán)格自動控制的代謝體系，并且(bìngqiě)有保證完成生命過程有序性的獨立的結(jié)構(gòu)裝置。,細(xì)胞是有膜包圍的能進(jìn)行獨立繁殖的最小原生質(zhì)團(tuán)，簡單地說細(xì)胞是生命活動的基本單位。,,（3）、病毒與細(xì)胞在起源和進(jìn)化中的關(guān)系,病毒可能是細(xì)胞在特定條件下“扔出”的一個基因組，或者(huòzhě)是具有復(fù)制與轉(zhuǎn)錄能力的mRNA。這些游離的基因組只有回到它們原來的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境中才能進(jìn)行復(fù)制與轉(zhuǎn)錄。,第十七頁，共32頁。,第三(dì sān)講 細(xì)胞生物學(xué)研究方法,一、光學(xué)顯微鏡技術(shù),1、普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡技術(shù),普通光學(xué)顯微鏡（最大分辨率為0.2µm），主要由三部分組成：①光學(xué)放大系統(tǒng)，即目鏡和物鏡；②照 明系統(tǒng)；③機(jī)械和支架系統(tǒng)。,顯微鏡的性能優(yōu)劣決定于它的分辨率d。分辨率是指顯微鏡區(qū)分開相近(xiānɡ jìn)兩點的能力。,,a,λ為光源波長(bōcháng)，α為物鏡鏡口角 。n物鏡和標(biāo)本之間介質(zhì)的折射率。,,在可見光中，亮度最大時ｄ近似為,0.2μm,。即，使用普通光學(xué)顯微鏡，在中心照明的情況下，分辨距離的極限為,0.2μm,。也就是說，小于,0.2μm,的兩物體，普通光學(xué)顯微鏡無法區(qū)分。,使用紫外線，可以減小照明光線的波長，能使分辨距離達(dá)到,0.1μm,。但因紫外線不能為人眼所見。只能拍成照片后再觀察。,電子流的波長只有,0.00387nm,。利用“電子透鏡”或磁透鏡來控制電子流，所制成的電子顯微鏡的分辨距離達(dá)零點幾,nm,?？梢杂盟ビ^察原子的結(jié)構(gòu)。,d=,0·61λ,N · sin(ɑ/2),第十八頁，共32頁。,2、熒光顯微鏡技術(shù),在紫外光顯微鏡基礎(chǔ)上發(fā)展而來，利用樣品自發(fā)熒光和誘發(fā)熒光，可以對某些生物大分子進(jìn)行定性和 定位研究。不僅可以觀察固定切片標(biāo)本，還可以在活體染色后對活細(xì)胞進(jìn)行研究。,3、激光(jīguāng)共焦點掃描顯微鏡 技術(shù),共焦點是 指物鏡和聚光鏡同時聚焦到同一小點。它 在某一瞬間只用一束通過檢測器前的小孔的光成像，可顯著提高分辨率?？梢杂^察較厚樣品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。,,,,第十九頁，共32頁。,4、相差顯微鏡技術(shù)和微分干涉顯微鏡技術(shù),光線在通過密度不同(bù tónɡ)的介質(zhì)時，其滯留程度不同(bù tónɡ)，即產(chǎn)生了光程差和相位差。相差顯微鏡 的基本原理把光程差變成振幅差(即明暗)。從而提高樣品反差，故樣品不需染色，適合觀察活細(xì)胞。甚至研究細(xì)胞核、線粒體等細(xì)胞器的動態(tài)。它在結(jié)構(gòu)上與普通顯微鏡最大的不同(bù tónɡ)是在物鏡后裝有相差板。,微分干涉顯微鏡用的是偏振光，增加了樣品反差，并具有立體感，可作于研究活體細(xì)胞中較大的細(xì)胞器。,錄像增差顯微鏡技術(shù)在一定程度上可以填補(bǔ)光鏡與電鏡之間分辨率上的間隙。,,,,第二十頁，共32頁。,二、電了顯微鏡技術(shù),（一）電了顯微鏡基本知識,分辨率最終決定于光的波長，由于使用電子束作光源，電鏡的分辨率大大提高。電鏡的分辨率常常是超薄切片厚度(hòudù)的1/10，它的分辨率可達(dá)0.2nm，其放大倍數(shù)為106倍。,電鏡的基本構(gòu)造包括：①電子束照明系統(tǒng) ；②電磁透鏡成像系統(tǒng)；③真空系統(tǒng)；④記錄系統(tǒng)；⑤電源系統(tǒng)。,（二）主要電鏡制樣技術(shù)介紹,樣品制備技術(shù)的特殊要求：①樣品要薄；②更好地保持樣品的精細(xì)結(jié)構(gòu)；③樣品具有一定的反差。,第二十一頁，共32頁。,,主要的用于觀察生物樣品的電鏡技術(shù)有：①超薄切片技術(shù)；是觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)。②負(fù)染色技術(shù)；③冷凍斷裂和冷凍蝕刻電鏡技術(shù)；④ 電鏡三維重構(gòu)技術(shù)；⑤掃描電鏡技術(shù)（SEM）是觀察細(xì)胞表面形的有力工具。,（三）掃描隧道顯微鏡(STM),是一種探測(tàncè)微觀世界物質(zhì)表面形貌的儀器，在納米生物學(xué)的研究領(lǐng)域具有獨特的優(yōu)越性。,STM的特點：①具有原子尺度的高分辨本領(lǐng)；②可在真空、大氣、液體等條件下工作；③非破壞性測量。,第二十二頁，共32頁。,三、離心技術(shù)(jìshù)——細(xì)胞組分的分析方法,細(xì)胞成分分析和形態(tài)學(xué)觀察相結(jié)合，可揭示生物大分子在細(xì)胞內(nèi)的構(gòu)建及功能。,（一）用差速離心技術(shù)分離細(xì)胞器與生物大分子及其復(fù)合物,利用多種方法使細(xì)胞崩解，形成細(xì)胞器和細(xì)胞組分的混合勻漿，再通過差速離心，即利用不同(bù tónɡ)的離心速度所產(chǎn)生的不同(bù tónɡ)離心力，將各種亞細(xì)胞組分和各種顆粒分開。,（二）用平衡密度梯度離心技術(shù)分離精確分離,細(xì)胞不同(bù tónɡ)組分沉降率不同(bù tónɡ)，主要依賴于它們的形狀和大小，通常以沉降系數(shù)S來表示(沉降系數(shù)是指懸浮在密度較低的溶劑中的一種溶質(zhì)大分子，在每單位離心場作用下的沉降速率)。,第二十三頁，共32頁。,原位成分分析常利用一些顯色劑與所檢物質(zhì)的特殊基團(tuán)特異性結(jié)合的特征，通過染色反應(yīng)的部位和顏色的深淺來斷某種物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的分布與含量。,福爾根(Feulgen)反應(yīng)可特異顯示DNA的存在部位。,PAS反應(yīng)可確定多糖的存在。,四氧化鋨 可證明脂肪滴的存在。蘇 丹 Ⅲ和蘇丹(sūdān) 黑也常用于脂肪的鑒定。,米倫反應(yīng)及重氮反應(yīng)等用來測定蛋白質(zhì)。,四、顯色方法(fāngfǎ),——細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖類、脂質(zhì)等測定,第二十四頁，共32頁。,,五、熒光技術(shù)——特異蛋白質(zhì)抗原的定位與定性,免疫熒光和免疫電鏡是最常用的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)定位技術(shù)。,1、熒光染色技術(shù)和免疫熒光技術(shù),熒光染色技術(shù)是用熒光素（如核黃素、脂褐素）直接標(biāo)記物質(zhì)，在激發(fā)光的激發(fā)下，看到標(biāo)記物所發(fā)熒光。,免疫熒光技術(shù)就是將免疫學(xué)方法與熒光標(biāo)記技術(shù) 相結(jié)合研究特異蛋白質(zhì)抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。,2、免疫電鏡技術(shù),免疫電鏡技術(shù)使特異蛋白的定位與超微結(jié)構(gòu)結(jié)合起來，使抗原定位更準(zhǔn)確。如蛋白分泌(fēnmì)的研究、胞內(nèi)酶的研究、一些結(jié)構(gòu)蛋白的研究。,第二十五頁，共32頁。,六、原位雜交技術(shù)——細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性,用標(biāo)記的核酸探針通過分子雜交確定特殊核苷酸序列在染色體上或細(xì)胞中的位置的方法。,七、放射自顯影技術(shù)——研究生物大分子在細(xì)胞內(nèi)的合成動態(tài),放射自顯影技術(shù)是利用放射性同位素的電離輻射對乳膠的感光作用，對樣品中放射性標(biāo)記物進(jìn)行(jìnxíng)定性與定位測定。,放射自顯影技術(shù)包括兩個主要步驟：即同位素標(biāo)記的大分子前體的摻入和細(xì)胞內(nèi)同位素所在位置的顯示。,基本步驟為：摻入、制片、敷膠、曝光、顯影、鏡檢。,第二十六頁，共32頁。,第四講 細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作(cāozuò)技術(shù),（一）動物細(xì)胞培養(yǎng),從機(jī)體取出立即培養(yǎng)的細(xì)胞叫原代細(xì)胞（10代）。,將原代細(xì)胞分離、稀釋接種到新的培養(yǎng)中繼續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞為傳代細(xì)胞。,從原代培養(yǎng)細(xì)胞中分離出來的可繼續(xù)傳代繁殖到40—50的細(xì)胞群體叫細(xì)胞株，細(xì)胞具有接觸抑制的行為，有些(yǒuxiē)具有貼壁生長的行為，具有正常的遺傳物質(zhì)。,從原代細(xì)胞或細(xì)胞株中獲得的可無限傳代的細(xì)胞叫細(xì)胞系。細(xì)胞無接觸抑制行為，且具有遺傳突變，帶有癌細(xì)胞的特征。,一、細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)就是將動植物組織(zǔzhī)或細(xì)胞從機(jī)體取出，分散成單個細(xì)胞 或直接以單細(xì)胞 生物，給予必要的生長條件，讓其在培養(yǎng)瓶中或培養(yǎng)基上繼續(xù)生長與增殖。,第二十七頁，共32頁。,（二）動物細(xì)胞融合技術(shù)即單克隆抗體技術(shù),1975年英國學(xué)者M(jìn)ilestein等開創(chuàng)了將產(chǎn)生抗體的單個細(xì)胞同瘤細(xì)胞雜交的技術(shù)。他們的設(shè)計是經(jīng)綿羊紅細(xì)胞免疫過的小鼠脾細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)與骨髓瘤細(xì)胞融合，融合的雜交瘤具有兩種親本細(xì)胞的特性(tèxìng)即可分泌抗綿羊紅細(xì)胞的抗體，又可無限增殖。學(xué)者們紛紛利用這 一技術(shù)來制備針對不同抗原的高度純一的單克隆抗體。,單克隆抗體就是單個雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的克隆細(xì)胞群分泌的高度純一的抗體。,第二十八頁，共32頁。,動物細(xì)胞融合技術(shù)(jìshù)即單克隆抗體技術(shù)(jìshù),,,,,,,,,,骨髓瘤細(xì)胞(xìbāo)？,體外培養(yǎng)(péiyǎng),從培養(yǎng)液中獲取,抗原？,淋巴細(xì)胞？,體內(nèi)培養(yǎng),從腹水中提取,單克隆抗體,,,細(xì)胞融合,、篩選,雜交瘤細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng),第二十九頁，共32頁。,（三）植物細(xì)胞(xìbāo)培養(yǎng),1、單倍體細(xì)胞(xìbāo)培養(yǎng)：花藥離體培養(yǎng)。（秋水仙素）,2、原生質(zhì)體培養(yǎng)：去壁的植物細(xì)胞(xìbāo)叫原生質(zhì)體?？膳囵B(yǎng)成植株或體細(xì)胞(xìbāo)雜交植株。,植物(zhíwù)組織培養(yǎng),植物體細(xì)胞(xìbāo)雜交,,第三十頁，共32頁。,過程(guòchéng),離體的植物器官(qìguān)、組織或細(xì)胞,,愈傷組織(zǔzhī),根、芽,,植物體,外植體,脫分化,植物激素：,細(xì)胞分裂素、生長素,再分化,,植物組織培養(yǎng),,植物組織培養(yǎng)條件,：,,,含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、一定的溫度、空氣、無菌環(huán)境、適合的,PH,、適時光照等。,第三十一頁，共32頁。,植物,A,細(xì)胞,植物,B,細(xì)胞,,去壁,原生質(zhì)體,A,原生質(zhì)體,B,原生質(zhì)體融合,融合(rónghé)體,再生壁,雜種(zázhǒng)細(xì)胞,細(xì)胞分裂,愈傷組織,,雜種植株,去壁的常用(chánɡ yònɡ)方法：,酶解法（纖維素酶、果膠酶等）,,原生質(zhì)體融合方法,：,物理法：離心、振動、電刺激等,化學(xué)法：聚乙二醇（,PEG,）,植物體細(xì)胞雜交,過程示意圖,第三十二頁，共32頁。,